Coloração de Gram
Olá pessoal, meu nome é Lauana, sou Biomédica, pós graduanda em Microbiologia e vou dividir meus conhecimentos com vocês.
Disse meu professor na primeira aula de microbiologia “GRAM É O CARRO CHEFE DA BACTERIOLOGIA” e depois de algumas aulas consegui entender o motivo. Em 1884, um médico dinamarquês Hans Cristian Joaquim Gram, observou que as bactérias adquiriram coloração diferente de acordo com o corante que eram tratadas e isso permitiu que ele as classificasse como Gram positiva (coloração roxa) e Gram negativas (coloração rosa/vermelhas), durante os anos a técnica de coloração usada por Gram sofreu algumas modificações até chegar na que é utilizada nos dias de hoje.
Essa técnica classifica as bactérias com base na morfologia e nas diferenças de composição da parede celular, as Gram-positivas possuem uma espessa camada de peptideoglicano e ácido teicóico, e as Gram-negativas, uma fina camada de peptideoglicano, sobre a qual se encontra uma camada composta por lipoproteínas, fosfolipídeos, proteínas e lipopolissacarídeos.
A importância da técnica serve para um diagnóstico rápido e o monitoramento de infecções até o diagnostico final. É uma técnica simples e de baixo custo que segue o protocolo que padroniza essa coloração e pode sofrer algumas variações de acordo com o laboratório ou profissional que a utiliza.
Procedimentos
Preparo do esfregaço:
a- Pegar uma lâmina limpa no recipiente, secar e flambar rapidamente na chama do bico de Bunsen;
b- Identificar o lado da lâmina onde será feito o esfregaço;
c- Flambar a alça bacteriológica deixá-la esfriar e colocar na lâmina uma gota de solução salina fisiológica;
d- Flambar a agulha bacteriológica, deixar esfriar próximo a chama, abrir a placa com a cultura teste e tocar a colônia escolhida para retirada da amostra;
e- Esfregar o material com movimentos de rotação da alça bacteriológica, para se obter um esfregaço de forma oval, bem fino e uniforme;
f- Deixar secar nas proximidades da chama;
g- Fixar o esfregaço passando a lâmina (lado oposto ao esfregaço) 5 vezes na chama do bico de Bunsen (rapidamente).
Esfregaço amostra de fezes:
a- Colocar uma gota de solução fisiológica em uma lâmina e emulsionar uma pequena amostra de fezes sobra a gota;
b- Deixar secar perto do bico de Bunsen ou dentro da cabine de segurança e fixar no calor antes de corar.
Método de Coloração de Gram:
1) Cobrir toda a lâmina com solução cristal violeta (corante roxo), aguardar um minuto;
2) Lavar rapidamente em água destilada;
3) Cobrir a lâmina com solução de Iugol (mordente) por um minuto;
4) Lavar em água destilada;
5), Inclinar a lâmina e gotejar álcool-acetona ou álcool absoluto (cerca de 15 segundos). Lavar a lâmina rapidamente em água destilada;
6) Cobrir com fucsina de gram e aguardar 30 segundos;
7) Lavar a lâmina em água destilada e secar (sem esfregar);
8) Colocar uma gota de óleo de cedro sobre a lâmina e observar em objetiva de imersão (IOOX).
RESULTADO:
bactérias Gram-positivas: roxo
bactérias Gram-negativas: rosa/vermelho
Referencias:
OPLUSTIL, Carmen Paz; ZOCCOLI, Cássia Maria; BARBERINO, Maria Goreth M. de A. Microbiologia Clínica: 156 Perguntas e Respostas. São Paulo, Sarvier, 2012.
OPLUSTIL, Carmen Paz;et al (Org.). Procedimentos Básicos em Microbiologia Clínica. 3 ed. São Paulo, Sarvier. 2010.
